* Как выбрать размер пор вставной мембраны с камерой?
Во-первых, вам нужно определить, требует ли приложение, которое вы выполняете, клетки для прохождения через поры в мембране камеры. Как правило, эксперименты по совместному культивированию, эксперименты по переносу CACO-2 и построение моделей поляризации клеток не требуют проникновения клетки через мембрану, и в большинстве из них выбирают продукты с малыми размерами пор, такими как 0,4 мкм или 1,0 мкм. Однако при анализе миграции и инвазии клетки должны пройти через мембрану верхней камеры и достичь дорсальной стороны мембраны (в некоторых случаях они попадают в нижнюю камеру, например, при анализе миграции/инвазии суспензионные клетки). Следовательно, требуется больший размер пор (например, продукты с размером пор 8 мкм часто выбирают для анализа миграции и инвазии опухолевых клеток).
* Как выбрать материал мембраны камеры?
Существует два типа мембранных материалов: поликарбонат (ПК) и полиэстер или полиэтилентерефталат (ПЭТФ) для камер Jet Biofil.
Широко используются мембранные материалы ПК и ПЭТ. Основное различие между ними заключается в светопроницаемости, т. е. мембрана ПК полупрозрачна, что неудобно для наблюдения за морфологией клеток верхней камеры в процессе культивирования; Мембрана ПЭТ прозрачна, что удобно для наблюдения за состоянием клеток под фазово-контрастным микроскопом.
Кроме того, при размере пор 0,4 мкм плотность пор (количество пор на единицу площади) мембраны из поликарбоната и мембраны из полиэтилентерефталата отличается, и мембрана из поликарбоната обеспечивает более высокую плотность пор мембраны. Вы можете выбрать в соответствии с требованиями эксперимента (нужно ли вам наблюдать за состоянием клеток и нужна ли вам мембрана с более высокой плотностью пор).
* Если материал мембраны камеры отличается от материала чашки/бутылки для культивирования клеток, будет ли какая-либо разница в адгезии клеток?
Хотя материал мембраны камеры без покрытия (ПК или ПЭТ) отличается от материала обычных пластиковых чашек/бутылок для культивирования клеток (полистирол, ПС), обе стороны мембраны подвергаются обработке тканевой культуры (обработка TC), которая такая же, как обработка поверхности расходных материалов PS для культивирования клеток. Таким образом, в нормальных условиях адгезия клеток в камере должна быть такой же, как и в культуральной чашке/бутылке. В общей культуре клетки, которые необходимо покрыть матриксными белками для дополнительной адгезии, по-прежнему необходимо покрывать камерой. Метод покрытия подобен обычной поверхности культуры, и количество требуемой жидкости покрытия может быть преобразовано площадью поверхности мембраны камеры.
* Можно ли повторно использовать изделия с камерой после стерилизации?
Изделия с камерой являются одноразовыми и не подлежат повторному использованию. Материалы луночного планшета и мембраны камеры не выдерживают стерилизации паром под высоким давлением, и невозможно подтвердить, тщательно ли очищена повторно используемая камера, поэтому экспериментальный эффект повторного использования не может быть гарантирован.
* Должна ли камера вставной мембраны сочетаться со специальной приемной пластиной/нижней камерой?
Он подходит для обычных перфорированных планшетов для клеточных культур соответствующих спецификаций (таких как TCP010006, TCP010012, TCP010024 и т. д.).
* Нужно ли проводить «гидратацию» перед инокуляцией клеток?
Большинство приложений не требуют дополнительной операции «гидратации». Эта операция в основном используется для камеры инвазии, предварительно покрытой матригелем, который необходимо сбалансировать до комнатной температуры перед использованием и добавить бессывороточную среду, предварительно нагретую до 37 ℃, и гидратировать в инкубаторе в течение двух часов.
В некоторых случаях предварительное добавление среды в верхнюю и нижнюю камеры и предварительная инкубация в инкубаторе в течение более 1 часа может помочь клеткам прикрепиться к стенке, но большинство клеток можно инокулировать напрямую.
* Какова последовательность добавления жидкости к инокулированным клеткам?
Как правило, предварительно нагретую среду сначала добавляют в поры (нижнюю камеру) перфорированной пластины, а затем камеру осторожно помещают в поры. При размещении рекомендуется слегка наклонить камеру так, чтобы одна сторона сначала касалась уровня жидкости, чтобы предотвратить образование пузырьков под камерой, расположенной вертикально. После этого в камеру можно добавить однородно перемешанную клеточную суспензию.
* Поскольку на мембране камеры много пор, будет ли жидкость быстро просачиваться в нижнюю камеру, когда матриксный белок покрыт, или некоторое количество жидкости добавляется только в верхнюю камеру?
Как правило, нет. Диаметр пор на мембране камеры ограничен. Под действием поверхностного натяжения покрывающая жидкость, добавленная в верхнюю камеру, не будет быстро вытекать. Если за короткое время капает большое количество жидкости, проверьте, не треснула ли мембрана камеры или не повреждена ли она.
* В эксперименте по совместному культивированию, как расположить инокулированные клетки в верхней и нижней камерах?
Благодаря наличию пор на мембране камеры культуральная среда верхней и нижней камер может сообщаться между собой, а клетки, инокулированные в верхнюю и нижнюю камеры, взаимодействуют друг с другом. Позиционное расположение инокулируемых клеток должно учитывать удобство сбора клеток и проведения нисходящей детекции, а также разницу между площадями культивирования верхней и нижней камер (эффективная площадь роста верхней камеры меньше нижней камеры, и, соответственно, количество инокулируемых клеток может варьироваться). Вы можете обратиться к соответствующей литературе или провести предварительные эксперименты, чтобы окончательно определить экспериментальную схему.
* Можно ли переваривать и собирать клетки, инокулированные в камеру?
Да. Вы можете использовать реагенты (такие как трипсин и т. д.), которые переваривают соответствующие клетки в обычных сосудах для культивирования, и добавлять рекомендуемый объем пищеварительной жидкости как в верхнюю, так и в нижнюю камеру.
* Когда клетки, инокулированные в камере, обрабатывают лекарствами, нужно ли добавлять лекарство только в верхнюю камеру?
Из-за наличия пор на мембране камеры мы предлагаем добавить питательную среду, содержащую одинаковую концентрацию лекарств, как в верхнюю, так и в нижнюю камеры, чтобы обеспечить необходимую концентрацию лекарственного препарата.